Dětský areál Karlov, budova E4, 1. patro
Ke Karlovu 455/2, 128 08 Praha 2
tel.: (+420) 22496 7032, -7034
V enzymologické laboratoři je celostátně soustředěna diagnostika lysosomálních střádavých poruch (LSD). Její začátky v ČR spadají do poloviny osmdesátých let, kdy byla zahájena diagnostika na úrovni enzymu u některých sfingolipidos. Spektrum enzymové diagnostiky se v průběhu posledních 20 let rozrostlo prakticky na všechny známé lysosomální enzymopatie a v současnosti pokrývá celkem 30 chorob ze skupiny sfingolipidos, glykoproteinos, mukopolysacharidos (viz Metabolická příručka) a některá další vzácná onemocnění lysosomálního systému jako jsou deficity proteinových aktivátorů sfingolipidových hydrolas. Ve spolupráci s ostatními skupinami se pracovníci věnují i výzkumným projektům.
Pracovní tým
Vedoucí laboratoře: RNDr. Jana Ledvinová, CSc. (email: jana.ledvinova@lf1.cuni.cz)
Zástupce vedoucí laboratoře: Ing. Helena Poupětová (e-mail:hpoup@ lf1.cuni.cz)
Členové týmu: Ing. Jitka Honzíková, RNDr. Ladislav Kuchař, Ph.D., Ing. Linda Berná, PhD, Mgr. Jitka Rybová, Michala Fialová
Metody
Pro enzymovou analýzu jsou využívány především syntetické fluorogenní nebo chromogenní analogy přirozených substrátů lysosomálních hydrolas, v ojedinělých případech přirozené substráty značené radioisotopy nebo neradioaktivní značkou. Analyzovaným materiálem jsou leukocyty periferní krve, kožní fibroblasty, event. plasma.
Pro screeningové studie některých LSD byly zavedeny metody vyžívající jako diagnostický materiál suché kapky krve (Pompeho choroba, Fabryho choroba).
K prenatální diagnostice jsou využívány choriové klky, případně kultivovavé amniocyty.
Ve specifických případech jako jsou defekty proteinových aktivátorů lysosomálních hydrolas nebo deficit kyselé ceramidasy, lze k diagnostice využít zavedené funkční zátěžové testy se značeným substrátem in situ v buněčné kultuře, které jsou vyhodnocovány pomocí radioscanneru nebo tandemové hmotnostní spektrometrie. Užitečným doplňujícím testem je chromatografická nebo MS/MS analýza sfingolipidů v moči nebo vzorku tkáně. V této oblasti laboratoř poskytuje na vyžádání také zahraniční expertízy.
Přístrojové vybavení
Přístrojové vybavení odpovídá dobrému standardu biochemické laboratoře včetně přístrojů k vyhodnocování radioisotopů (scintilační counter Beckman, radioscanner RITA) a možností MS/MS analýz (AB/MDS SCIEX API 3200).
Akreditace, kontrola kvality
Laboratoř je akreditovaná podle ČSN ISO 15189.
Lysosomální skupina ÚDMP se stala významným členem European Study Group of Lysosomal Disorders a laboratoř je od r. 2006 zapojena do mezinárodního systému externí kontroly kvality QA-ESGLD/ERDNIM. Byla opakovaně vyhodnocena jako jedna z šesti nejlepších evropských laboratoří svého oboru.
Počty pacientů/vyšetření
V enzymologické laboratoři je průměrně vyšetřeno 500 - 600 pacientů s podezřením na LSD ročně, z toho 2/3 postnatálně, cca 10 prenatálně a 1/3 v suché krevní kapce.
Ve spolupráci s ostatními diagnostickými laboratořemi je diagnóza potvrzena u cca 100 nových pacientů ročně.
Seznam vyšetřovaných enzymů
Metabolická oblast Onemocnění Enzym / event. nekatalytický protein Materiál Lysozomální střádavá onemocnění (LSD) screening LSD Chitotriosidáza * Plazma, Sérum glykogenózy glykogenóza II, Pompeho choroba kyselá α-1,4-glukosidáza Leukocyty mukopolysacharidózy mukopolysacharidóza I (m.Hurler/Scheie) α-L-iduronidáza Leukocyty mukopolysacharidóza II (m.Hunter) iduronosulfátsulfatáza Leukocyty, Plazma, Sérum mukopolysacharidóza IIIA (m.Sanfilippo A) heparinsulfamidáza Leukocyty mukopolysacharidóza IIIB (m.Sanfilippo B) α-N-acetyl-D-glukosaminidáza Leukocyty, Plazma, Sérum mukopolysacharidóza IIIC (m.Sanfilippo C) acetyl-CoA : α-glukosaminid N-acetyltransferáza Leukocyty mukopolysacharidóza IIID (m.Sanfilippo D) N-acetylglukosamin-6-sulfátsulfatáza Leukocyty mukopolysacharidóza IVA (m.Morquio A) N-acetylgalaktosamin-6-sulfátsulfatáza Leukocyty mukopolysacharidóza IVB (m.Morquio B) β-galaktosidáza Leukocyty mukopolysacharidóza VI (m.Maroteaux-Lamy) arylsulfatáza B Leukocyty mukopolysacharidóza VII (m.Sly) β-glukuronidáza Leukocyty sfingolipidózy a lipidózy GM1 gangliosidóza β-galaktosidáza Leukocyty metachromatická leukodystrofie arylsulfatáza A Leukocyty Gaucherova choroba glukocerebrosidáza (kyselá β-glukosidáza) Leukocyty Fabryho choroba α-galaktosidáza Krevní papírek (muži) Krabbeho choroba galaktocerebrosidáza Leukocyty Niemann-Pickova choroba typ A/B kyselá sfingomyelináza Leukocyty GM2 gangliosidóza, β-hexosaminidáza Leukocyty, Plazma, Sérum GM2 gangliosidóza, β-hexosaminidáza A Leukocyty, Plazma, Sérum choroba ze střádání esterů cholesterolu kyselá lipáza Leukocyty prosaposinový deficit deficit proteinových aktivátorů A,B,C,D skupiny lysozomálních glykosidáz Glykolipidy v moči
glykoproteinózy a-mannosidóza α-mannosidáza Leukocyty b-mannosidóza β-mannosidáza Leukocyty fukosidóza α-L-fukosidáza Leukocyty Schindlerova choroba α-N-acetyl-D-galaktosaminidáza Leukocyty sialidóza, α-neuraminidáza Fibroblasty mukolipidóza II/III, I-cell disease lysozomální hydrolázy N-acetyl-glukosaminfosfotransferáza Plazma, Sérum Fibroblasty
NCL neuronální ceroidlipofuscinóza typ 1 (NCL1) palmitoyl-proteinthioesteráza Leukocyty neuronální ceroidlipofuscinóza typ 2 (NCL2) tripeptidylpeptidáza I Leukocyty Jiné X-vázaná ichtyóza steroidsulfatáza, arylsulfatáza C Leukocyty
Krevní papírek
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Leukocyty, Plazma, Sérum
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Sandhoffova choroba
Fibroblasty
Tay-Sachsova choroba
Fibroblasty
Wolmanova choroba
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
mukolipidóza I
Fibroblasty
Fibroblasty
Fibroblasty
* normální aktivita chitotriosidázy nevylučuje lysozomální střádavé onemocnění
Cena vyšetření pro samoplátce – kontaktujte prosím udmp@vfn.cz
